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呕吐毒素（Deoxynivalenol）ELISA检测试剂盒

产品名称：呕吐毒素ELISA检测试剂盒

产品概述：脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol，DON)又称呕吐毒素(vomitoxin)，主要是由镰刀菌的某些种产生的化学结构和生物活性相似的有毒代谢产物——单端孢霉烯族化合物中的一种。DON 的主要产生菌是禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum)，DON广泛存在于，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品，人和动物在误食被该毒素污染的粮谷类后可以产生广泛的毒性效应。近年来发现DON可能与人类食管癌、IgA肾病有关，对人类及动物的健康构成威胁。DON属于剧毒或中等毒物，人畜摄入了被DON污染的食物／饲料后，会导致厌食、呕吐、、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。研究表明，DON可能对免疫系统有影响，有明显胚胎毒性和一定致畸作用，可能有遗传毒性，但无致癌、致突变作用。由于DON的危害严重，引起了各国的普遍重视。谷物及饲料中DON的含量有严格的限量标准。我国谷物中DON 的限量标准为1．0 mg／kg 。因此，有必要对其进行有效的监控。HPLC或GC-MS用作检测呕吐毒素的方法，但是其前处理步骤繁琐，费用昂贵。酶联免疫检测试剂盒则可经济、快速地检测呕吐毒素。

适用范围

呕吐毒素ELISA检测试剂盒可定性、定量测定大米、小米、面等谷物和饲料中的呕吐毒素。

试验原理

 呕吐毒素ELISA检测试剂盒采用竞争ELISA，在微孔板上预包被呕吐毒素抗原，加入样本/呕吐毒素标准品溶液及辣根过氧化物酶标记的呕吐毒素抗体。样本或标准品溶液中的呕吐毒素与预包被在板孔上的呕吐毒素抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的呕吐毒素抗体，与样本或标准品溶液中的呕吐毒素结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物呕吐毒素抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物呕吐毒素的含量。

试剂配制

1、洗涤工作液：用去离子水将浓缩洗涤液按1:9体积比进行稀释（1份浓缩洗涤液+9份去离子水）。

2、样品提取液：用去离子水将浓缩样品提取液按1:9体积比       进行稀释（1份浓缩样品提取液+9份去离子水）。

操作步骤

1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。

2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封，保存于2～8℃。不要冷冻。

3、洗涤工作液在使用前也需回温。

4、将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。

5、加标准品/样本50ml到对应的微孔中，加入稀释好酶标物50ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应15min。

6、小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液300ml/孔，充分洗涤5次，每次间隔30s，用吸水纸拍干。

7、加入显色液100ml/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15min。

8、加入终止液50ml/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处测定每孔OD值。

注意事项

1.  室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温（20～25℃）会导致所有标准的OD值偏低。

2.  在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。

3.  每加一种试剂前需将其摇匀。

4.  反应终止液为2M盐酸，避免接触皮肤。

5.  不要使用过了有效日期的试剂盒；也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂，掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低；不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。

6.  储存条件：

7.  保存试剂盒于2～8℃，不要冷冻，将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感，因此要避免直接暴露在光线下。

8.  试剂变质的迹象：

9.  发色试剂有任何颜色表明发色剂变质，应当弃之。0标准的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）时，表示试剂可能变质。

10.  在加入显色液后，一般显色时间为20～30min即可。若颜色较浅，可延长反应时间到35min（或更长），但不得超过40min。反之，则减短反应时间。

呕吐毒素ELISA检测试剂盒反应温度为25℃，温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。

试剂盒组成

1. 96孔酶标板×1块

2. 标准液×6瓶：（1ml/瓶）

0ppb, 3ppb, 9ppb, 18ppb, 36ppb,72ppb

3. 酶标物1瓶………………………………………… 6ml

4. 显色液1瓶…………………………………………12ml

5. 终止液………………………………………………6ml

6. 浓缩洗涤液 （10×）………………………………40ml

7. 浓缩样品提取液（10×）…………………………40ml

贮藏条件及保存期

        贮藏条件：保存试剂盒于2～8℃。

        保存期：呕吐毒素ELISA检测试剂盒有效期为12个月。