赭曲霉毒素ELISA检测试剂盒
产品名称:赭曲霉毒素试剂盒
产品概述:赭曲霉毒素A是由曲霉菌和青霉属菌株产生的一种有毒真菌次级代谢产物,广泛存在于谷物及谷物产品、香料和咖啡豆等产品中。赭曲霉毒素A具有很强的肝脏和肾脏毒性,并有致畸、致突变和致癌作用,严重危害人类健康。赭曲霉毒素一般用薄层色谱、高效液相色谱法检测,但因其操作繁杂、费用昂贵而影响实际应用。而使用赭曲霉毒素ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中赭曲霉残留。
适用范围
赭曲霉检测试剂盒可定性、定量检测谷物、饲料、面粉、啤酒、红酒、饮料等样本中的赭曲霉毒素。
试验原理
赭曲霉毒素试剂盒采用竞争ELISA方法,在酶标板微孔条上预包被赭曲霉毒素A抗原,加入样本及辣根过氧化物酶标记的赭曲霉毒素A 抗体。样本或标准溶液中的赭曲霉毒素A与预包被在微孔板上的赭曲霉毒素A抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的赭曲霉毒素A 抗体,与样本或标准溶液中的赭曲霉毒素A结合的酶标抗体在洗涤时被除去,再加入显色液,读取吸光度值。样本的吸光值与其所含残留物赭曲霉毒素A抗原的含量成负相关。对照标准曲线,即可得出相应残留物赭曲霉毒素A的含量。
试剂配制
1、将赭曲霉毒素试剂盒取出放置在室温中,使试剂盒回温至室温(20~25℃)。
2、 样品稀释液:用去离子水将浓缩样品稀释液按1:9体积比进行稀释(1份浓缩样品稀释液+9份去离子水)。2-8℃保存三个月。用前混匀。
3、 10倍稀释洗涤工作液:用去离子水将浓缩洗涤液按1:9体积比进行稀释(1份浓缩洗涤液+9份去离子水),2-8℃保存三个月。用前混匀。
操作步骤
1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平衡30min以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放进原锡箔袋中并且与提供的干燥剂一起重新密封,保存于2~8℃。不要冷冻。
3、洗涤工作液在使用前也需回温。
4、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本:加标准品/样本50ul/孔到对应的微孔中,再加入酶标物50ul/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境中反应15min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤工作液300ul/孔,充分洗涤5次,每次间隔30s,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、显色:加入底物液100ul/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境反应15min。
8、测定:加入终止液50ul/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪于450nm处测定每孔OD值。
注意事项
1、室温低于20℃或试剂及样本没有回到室温(20~25℃)会导致所有标准的OD值偏低。
2、在洗板过程中如果出现板孔干燥的情况,则会出现标准曲线不成线性,重复性不好的现象。所以洗板拍干后应立即进行下一步操作。
3、每加一种试剂前需将其摇匀。
4、反应终止液为2M硫酸,避免接触皮肤。
5、不要使用过了有效日期的试剂盒;也不要使用过了有效期的试剂盒中的任何试剂,掺杂使用过了有效期的试剂盒会引起灵敏度的降低;不要交换使用不同批号试剂盒中的试剂。
6、储存条件
保存赭曲霉毒素试剂盒于2~8℃,不要冷冻,将不用的酶标板微孔板放进自封袋重新密封。标准物质和无色的发色剂对光敏感,因此要避免直接暴露在光线下。
7、试剂变质的迹象
发色试剂有任何颜色表明发色剂变质,应当弃之。0标准的吸光度(450/630nm)值小于0.5(A450nm<0.5)时,表示试剂可能变质。
8、赭曲霉毒素试剂盒反应温度为25℃,温度过高或过低将导致检测吸光度值和灵敏度发生变化。
试剂盒组成
1、96孔酶标板×1块
2、标准液×6瓶:(1ml/瓶)
0ppb, 1ppb, 2ppb, 6ppb, 18ppb,54ppb
3、酶标物 1瓶 …………………………………………… 6ml
4、显色液1瓶 ……………………………………… 12ml
5、终止液 ………………………………………6ml
6、浓缩洗涤液 (10×) ………………………………… 40ml
7、浓缩样品稀释液(10×) ……………………………… 20ml
8、操作说明书
贮藏条件及保存期
贮藏条件:保存试剂盒于2~8℃。
保存期:赭曲霉毒素试剂盒有效期为12个月。
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